Molecular analysis of rubella virus in travelers suspected of measles infection in São Paulo, Brazil / Análise molecular do vírus da rubéola em turistas suspeitos de infecção por sarampo em São Paulo, Brasil

OBJECTIVE: To identify measles virus genotypes in three cases of travelers suspected of measles infection. METHODS: Samples (blood and urine) were collected for serology, virus isolation, and genotyping. Sera were analyzed for IgM antibodies against measles virus and rubella virus by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (Siemens - Marburg, Germany). Clinical samples (lymphocytes and urine) were inoculated into Statens Serum Institute rabbit corneal epithelial cell line- ATCC CL 60 (SIRC) and Vero Slam cells. RNA was extracted from clinical samples and cell culture was inoculated and processed by polymerase chain reaction (PCR) with oligonucleotides specific for measles virus (MV) and rubella virus (RV). RESULTS: All patients showed IgM negative serology for MV and positive IgM for RV. RV belonging to genotypes 1B, 1C, and 1E were isolated from patients who came from Finland, Peru, and Germany, respectively. Genotype 1B has been found in Europe and on the East Coast of South America; 1C has been found in Peru and the West Coast of South America, and 1E, first identified in 1997, now appears to have worldwide distribution. CONCLUSION: Information about RV and MV genotypes circulating in São Paulo is essential for the control of measles, rubella, and congenital rubella syndrome (CRS) in Brazil.

OBJETIVO: Identificar o genótipo do vírus do sarampo em três viajantes suspeitos de infecção por sarampo. MÉTODOS: Amostras (sangue e urina) foram coletadas para sorologia, isolamento viral e genotipagem. As sorologias para pesquisa de IgM para o vírus do sarampo e da rubéola foi realizada utilizando-se o kit de ELISA (Siemens - Marburg, Alemanha). As amostras clínicas (linfócito e urina) foram inoculadas na SIRC (Statens Serum Institute rabbit corneal epithelial cell line-ATCC CL 60) e nas células Vero Slam. O RNA foi extraído das amostras clínicas e das células inoculadas e processadas por PCR, utilizando oligonucleotideos específicos para sarampo e rubéola. RESULTADOS: Todos os pacientes apresentaram sorologia IgM negativa para sarampo e positivo para rubéola. Os vírus da rubéola isolados dos pacientes que vieram da Finlândia, Peru e Alemanha pertencem aos genótipos 1B, 1C e 1E, respectivamente. O genótipo 1B foi encontrado na Europa e na costa oriental da América do Sul, o genótipo 1C foi encontrado no Peru e na costa oeste da América do Sul e o genótipo 1E, identificado pela primeira vez em 1997, agora aparenta ser um genótipo com distribuição mundial. CONCLUSÃO: O conhecimento dos genótipos de sarampo e rubéola que circulam em São Paulo é essencial para o controle do sarampo, rubéola e síndrome da rubéola congênita.

Soroprevalência da rubéola na população urbana e rural de Guaratinguetá / Seroprevalence of rubella in urban and rural populations, Guaratinguetá

OBJETIVO: Determinar a prevalência de anticorpos para a rubéola na população de 15 a 39 anos no município de Guaratinguetá, São Paulo, SP. MÉTODOS: Neste estudo, 996 amostras foram colhidas após consentimento informado e esclarecido entre homens e mulheres na faixa etária de 15 a 39 anos. Os anticorpos da classe IgG foram detectados por ELISA usando kit comercial Rubenostika IgGII (Organon Teknika AS, Holland). As faixas etárias foram estratificadas em três categorias: 15-19 anos; 20-29 anos e 30-39 anos. As análises estatísticas foram realizadas pelo software MINITAB versão 14.0 (Minitab Inc, EUA). RESULTADOS: A proporção de soros reagentes para anticorpos da classe IgG nas faixas etárias estudadas foram: 92,7 por cento positivos de 15-19 anos; 82,4 por cento de 20 a 29 anos e 90,7 por cento de 30-39 anos com diferença significativa na proporção de soropositivos pela faixa etária ( p < 0,001 ). A variação de intensidade da resposta anticórpica foi calculada e os resultados mostram que há diferença significativa (p = 0,002) entre as médias das três faixas etárias estudadas. Em relação à área rural e urbana, a média da relação DO/CO para cada faixa etária, observa-se que há uma tendência significativa de médias menores na zona rural. O mesmo ocorre quando são calculadas as proporções de soropositivos. CONCLUSÃO: Os resultados obtidos mostraram que o percentual e indivíduos com anticorpos da classe IgG contra a rubéola na faixa etária de 20-29 anos foi abaixo aquela observada em faixas etárias inferiores ou superiores. Além disso, a diferença da soropositividade entre a zona urbana e rural traduz uma suscetibilidade com potencial de manter a circulação do vírus nesta região.

OBJECTIVE: To investigate seroprevalence of rubella antibodies in a 15 to 39 year old population in the municipal district of Guaratinguetá. METHODS: The 996 samples studied were collected in urban and rural zones, after informed and elucidated consent from men and women stratified by age (15 -39 years). Rubella IgG antibodies were detected by ELISA using the commercial kit Rubenostika IgGII (Organon Teknika THE, Holland). Age groups were stratified in 3 categories: 15-19; 20-29 and 30-39 years of age. Statistical analyses were accomplished with the software MINITAB version 14.0 (Minitab Inc, USA). RESULTS: The proportion of seropositives for antibodies of the IgG class were: 92.7. percent positive for 15-19 years; 82.4 percent for 20 to 29 years and 90.7 percent for 30-39 years, with a significant difference in the seropositive proportions by age group (p <0.001). Variation of intensity of antibody response was calculated and results show a significant difference (p = 0.002) between means of the 3 age groups studied. In relation to rural and urban zone average of the ratio DO/CO for each age group, a significant tendency towards a lower average was observed in the rural zone. The same was true when the seropositive proportions were calculated. CONCLUSION: Results showed that the percentage and individuals with antibodies of the IgG class against rubella in the 20-29 year age group was lower than that in the younger and older age groups. Furthermore, the difference between seropositivity in the urban and rural zones discloses susceptibility with a potential for continued circulation of the virus in this zone.

Isolation of the wild-type rubella virus in rabbit kidney cell line RC-IAL

O presente estudo descreve o isolamento e o crescimento do vírus selvagem da rubéola na linhagem celular RC-IAL. A susceptibilidade da linhagem celular RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz) para o vírus-padrão da rubéola RA 27/3 foi anteriormente descrito por nós(4). Amostras de 20 pacientes com suspeita de infecção por rubéola foram testadas por sorologia, isolamento viral e nested PCR. Os soros foram testados por Elisa para detecção de anticorpos reagentes para rubéola e nested PCR para detectar o RNA viral. As amostras clínicas de sangue, urina, fragmento de placenta e líquido amniótico foram inoculadas nas linhagens celulares RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz) e Sirc (córnea de coelho). O vírus da rubéola foi isolado das amostras clínicas de quatorze pacientes. O efeito citopático (ECP) foi examinado por microscopia de contraste de fase, e o RNA do vírus da rubéola foi amplificado por nested PCR. Os resultados obtidos mostram que a linhagem celular RC-IAL é um excelente substrato para isolamento do vírus da rubéola. Estes dados são importantes, pois poucas linhagens descritas na literatura apresentam efeito citopático que possibilite seu uso para isolar o vírus da rubéola de material clínico.

Infectivity of wild-type rubella virus in fibrochondrocyte cells

Este trabalho descreve o rápido crescimento do vírus da rubéola em amostras clínicas em cultura primária de fibrocondrócitos com desenvolvimento de efeito citopático em resposta a infecção pelo vírus da rubéola. As células foram isoladas do menisco do joelho do coelho após extração enzimática e incubadas a 37ºC em meio DMEM suplementado com 10 por cento de soro fetal bovino. Seis amostras clínicas de urina, sangue e liquor foram inoculadas na cultura primária de fibrocondrócitos e na linhagem Vero. As células de fibrocondrócitos apresentaram efeito citopático após 24 horas de incubação e o vírus foi detectado por imunoistoquímica e Nested PCR. As células infectadas apresentaram aspecto arredondado, com formação de alguns prolongamentos citoplasmáticos e sincícios, produzindo células multinucleadas. A curva de crescimento da infecciosidade do vírus foi mais alta quando comparada com a linhagem celular Vero.

Cultura primária de condrócitos articular humana em monocamada / Culture of human articular chondrocyte in monolayer

O objetivo deste trabalho foi padronizar a metodologia para obtenção de cultura primária de condrócitos de cartilagem hialina articular humana para sua utilização em transplante autólogo. Foram selecionados cinco pacientes do Instituto de Ortopedia e Traumatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (IOT-HC-FMUSP) sem doença degenerativa articular, com indicação de cirurgia artroscópica para correção de afecção do ligamento cruzado anterior do joelho. Os fragmentos de cartilagem articular pesando aproximadamente 300-500 mg foram colocados em placas de Petri contendo meio de Eagle modificado por Dulbecco's (DMEM) com 40ug/ml de gentamicina. Cada fragmento foi cortado e colocado em 2mg/ml de colagenase diluída em meio DMEM com 10 por cento de soro fetal bovino (SFB). As células foram isoladas e cultivadas em frasco de cultura T25 em meio DMEM suplementado com 10 por cento de SFB. As células aderiram ao frasco de cultura após 24h e após o 3º dia de cultivo as células apresentavam morfologia elipsóide e estrelada. As culturas foram fixadas e coradas intensamente com azul de toluidina sugerindo que as células iniciaram a síntese de uma nova matriz extracellular. A curva de crescimento mostrou que a razão de crescimento foi em torno do segundo e terceiro dia de cultivo, com a duplicação do número de células semeadas. As culturas apresentaram alta viabilidade celular após o congelamento celular em nitrogênio líquido

Rash after measles vaccination: laboratory analysis of cases reported in Säo Paulo, Brazil

OBJETIVO: O diagnóstico diferencial de doenças exantemáticas causadas por vírus é geralmente difícil, e equívocos näo säo raros, especialmente depois da introduçäo da vacina contra o sarampo e a rubéola. Um estudo laboratorial foi conduzido com o objetivo de estabelecer o diagnóstico etiológico de casos de exantema em crianças que receberam a vacina contra o sarampo. MÉTODOS: Soros de casos de exantema em crianças que receberam vacina contra o sarampo, em 1999, foram analisados para anticorpos IgM contra os vírus do sarampo, da rubéola e do parvovírus humano B19 (HPV B19), por técnicas comerciais de Elisa, e o herpes vírus humano tipo 6 (HHV 6), por técnica comercial de imunofluorecência. A viremia para cada um desses vírus foi testada pela reaçäo em cadeia da polimerase (PCR). RESULTADOS: Foram notificados, em 1999, 17 casos de crianças com exantema pós-vacinal. A idade das crianças era de nove a 12 meses (mediana, dez meses). Uma amostra de sangue colhida para investigaçäo laboratorial foi obtida para cada criança. O tempo decorrido entre a aplicaçäo da vacina e o aparecimento do exantema variou de um a 60 dias. Os resultados da sorologia das 17 crianças sugeriram o seguinte diagnóstico etiológico para o exantema: 17,6por cento (três em 17) infecçäo pelo HPV B19; 76,5por cento (13 em 17) infecçäo pelo HHV 6; 5,9por cento (um em 17) exantema originado pela vacina do sarampo. CONCLUSAO: Os resultados indicaram que a infecçäo pelo HPV B19 ou pelo HHV 6 pode ser diagnosticada como sarampo de origem vacinal. Portanto, é fundamental incluir esses vírus no diagnóstico laboratorial para corretamente apontar a etiologia das doenças exantemáticas, evitando, assim, atribuir à vacina do sarampo efeito colateral

Detection of rubella virus RNA in serum samples by RT-PCR assay / Detecçäo do RNA do vírus da rúbeola no soro através de RT-PCR

Em geral, a reaçäo de polimerizaçäo em cadeia precedida de retrotranscriçäo (RT-PCR) tem demonstrado ser um método rápido e sensível para detectar o RNA do vírus rubéola em uma variedade de materiais clínicos. A reaçäo de RT-PCR foi utilizada para detectar o vírus no soro e confirmar o teste sorológico em indivíduos infectados com vírus da rubéola. Para este estudo, uma fita simples de RNA viral, extraída do soro, foi usada como fita-molde para para a transcriçäo reversa, seguida da amplificaçäo com dois diferentes pares de olinucleotídeos iniciadores e de uma segunda amplificaçäo com outros pares de oligonucleotídeos. O método do RT-PCR foi utilizado para se examinar amostras de soro de nove pacientes com sorologia confirmada para o vírus da rubéola. Quatro soros testados por RT-PCR tiveram como resultado infecçäo pelo vírus da rubéola. Os soros foram primeiramente analisados utilizando-se de 500µl para a extraçäo de RNA. O vírus da rubéola foi também analisados utilizando-se 500µl para a extraçäo de RNA. O vírus da rubéola foi também analisado utilizando-se volumes menores de soro, e somente uma amostra foi amplificada a partir da extraçäo do RNA viral de 300µl. Neste estudo, a estratégia de se utilizar soro no desenvolvimento do teste RT-PCR sugere ser uma alternativa a mais para o diagnóstico da infecçäo pelo vírus da rubéola

RC-IAL cell line: sensitivy of rubella virus grow

Objetivo: Descreve-se o crescimento do vírus-padräo da rubéola RA-27/3 na linhagem celular RC-IAL, com desenvolvimento de efeito citopático em resposta à infecçäo viral. Para este propósito, o vírus-padräo foi titulado simultaneamente nas linhagens celulares Vero, SIRC e RK13. Métodos: O vírus-padräo da rubéola RA-27/3 foi inoculado na linhagem celular RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz). Placas contendo 1,5c105 células/ml foram inoculadas com 0,1ml do contendo 1x104 DICT50/0,1 ml. O efeito citopático correspondente a 25 por cento foi observado após 48h e 100 por cento após 96h. Os resultados obtidos foram comparados com o crescimento do vírus nas linhagens celulares SIRC, Vero e RK13. O vírus da rubéola na linhagem celular RC-IAL foi detectado por imuno-histoquímica. Resultados: As células inoculadas com o vírus da rubéola apresentaram efeito citopático nas primeiras 48h. As células apresentaram aspecto arredondado, com formaçäo de alguns prolongamentos citoplasmáticos e sincícios, produzindo células multinucleadas. A curva do crescimento da infectividade do vírus foi praticamente a mesma que a observada nas outras linhagens celulares. Conclusäo: Os resultados obtidos mostram que a linhagem celular RC-IAL é um ótimo substrato para crescimento do vírus da rubéola, pois poucas linhagens celulares descritas na literatura apresentam efeito citopático considerável e podem ser utilizadas para preparaçäo de antígenos e nos testes de diagnóstico sorológico para o vírus da rubéola

Detecção da citotoxicidade de materiais biocompatíveis nas linhagens celulares MRC-5, HeLa e RC-IAL / Detection of cytotoxicity of biocompatible materials in MRC-5, HeLa, and RC-IAL cell lines

The sensitivity of diploid and heteroploid cell lines for detection of cytotoxicity using the agar diffusion method on cell culture, was tested with ascorbic acid solution of different concentrations. A total of 562 samples of 21 various materials were tested. The heteroploid cell line, RC-IAL, showed in relation to the MRC-5 and HeLa cell lines, greater sensitivity because it showed the presence of cytotoxic effect with the lowest concentration used (10 and 25 micrograms/ml) of ascorbic acid and showed greater diameter of cytotoxic halo in 15 samples and equal diameter in 16 of the 43 positive samples (7.6). Out of 43 positive samples, the MRC-5 line did not show cytotoxicity in 3 sponge samples and 1 of acrylic resin. The PVC (polyvinylchloride) and polyethylene rarely showed positivity, while, the plastic, cotton and acrylic resin demonstrated cytotoxicity in about 5 of samples. We thus suggest the use of the RC-IAL and HeLa cell lines for continuation of this type of analysis at Adolfo Lutz Institute.

Estudo dos linfócitos circulantes por anticorpos monoclonais na miastenia grave / Circulating lymphocytes by monoclonal antibodies in myasthenia gravis

Os autores avaliam os linfócitos T (CD3, CD4, CD8, CD4/8) por anticorpos monoclonais e rosácea em 20 pacientes e linfócitos B por Fab' por imunofluorescência em 9 pacientes com miastenia grave. Observam elevaçäo significante na populaçäo de linfócito B e reduçäo nos linfócitos T totais CD3 + por rosáceas. Näo foram observadas modificaçöes nas subpopulaçöes celulares com timectomia e corticosteróides